Техника раздавленной капли. Метод раздавленной капли

Микроскопические одноклеточные организмы, называемые «микробы», а также некоторые бактерии, например, колиформные (формой напоминающие палочки) в огромном количестве содержатся в воде, особенно если она из природных источников - заросший и илистый пруд, ручей, лужа, речные заводи. Рассмотрим, как приготовить препарат «раздавленная капля», данный опыт считается простым и подходит в качестве начального обучения ребенка или начинающего биолога азам микроскопирования.

Препаратом называется подготовленная специальным образом для детального исследования на микроскопе биологическая ткань, микроорганизмы, субстрат. Изучение осуществляется на клеточном уровне, при этом функционирование органов или органоидов может быть остановлено действиями исследователя с применением фиксаторов. Неотъемлемой составной частью микропрепарата являются предметные и покровные стекла, между которыми он заключается для придания биоткани максимального плоского состояния, повышающего эффективность фокусировки на большом увеличении. Склеиваются стеклянные поверхности при помощи капли воды или бесцветной прозрачной пихтовой смолы. Пузырьки воздуха удаляются, края склейки протираются промокашкой. Если микропрепарат приготовлен для временного использования, стеклышки подлежат тщательной промывке, а отработанный образец уничтожению.

Последовательность, необходимая для приготовления препарата раздавленная капля , а также используемые инструменты:

Регистрация результатов наблюдения может происходить глазами или путем фотографирования. Для этого понадобится цифровая камера-окуляр, вставляющаяся вместо обычного в окулярную трубку и подключающаяся к компьютеру через последовательный порт USB. В этом случае картинка будет транслироваться на мониторе, пользователю будут доступны функции измерения размеров и углов, графическая обработка и фотосъемка.

Микромир, невидимый невооруженным зрением, способен впечатлить взрослых и детей, проявляющих интерес к науке. Микроскопия для многих становится не только элементом общеобразовательного процесса, но и увлекательным хобби. На что еще можно посмотреть в микроскоп, как делать микропрепараты с насекомыми, клетками лука, тонкими растительными срезами - вы можете прочитать в познавательных статьях и обзорах в тематическом блоге (раздел «Интересно»). Свои вопросы рекомендуем присылать в обратной связи или по электронной почте.

Раздавленная капля - это способ наблюдения живых микроорганизмов в микроскоп. На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала, ее осторожно накрывают покровным стеклом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Капля должна заполнять все пространство между стеклами л не выступать за края покровного стекла. Иногда, если препарат нужно рассматривать длительное время, края покровного стекла предварительно смазывают вазелином. Препарат можно окрасить, осторожно добавив к нему петлей разведенный краситель. См. также Бактериологическое исследование, Микроскопическая техника.

Раздавленная капля - это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.

Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тканей на предметное стекло наносят каплю суспензии клеток в культуральной жидкости. Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100-1:1000 и т. д.); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию. Так как при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1-1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.

Помимо изучения неокрашенных бактерий, простейших и т. д., метод раздавленной капли позволяет применять методы прижизненной окраски. В качестве красителя широко используют 0,1% водный раствор нейтрального красного. См. также Микроскопическая техника.

Методика приготовления препарата:

· на середину предметного стекла наносят каплю бульонной культуры вульгарного протея. Каплю осторожно покрывают покровным стеклом, не допуская образования между стеклами пузырьков воздуха;

· препарат микроскопируют сухой системой, с использованием объектива х40. Оптика микроскопа должна быть очень чисто протерта, конденсор слегка опущен, а его диафрагма прикрыта с целью затемнения поля зрения.

· протей является перитрихом, передвигается в поле зрения беспорядочно. Важно не спутать характер его движения с пассивным перемещением в результате броуновского движения - беспорядочного колебания клеток.

4. Изучение подвижности протея (Proteus vulgaris) в препарате «висячая капля» с использованием фазово-контрастной микроскопии (демонстрация). Препарат висячей капли готовят, нанося в центр покровного стекла каплю исследуемого материала. Предметное стекло с лункой, края которой смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. После этого препарат переворачивают покровным стеклом вверх; капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. При микроскопии сначала используют объектив «малого» увеличения (х8) для нахождения края капли, после чего определяют подвижность бактерий с помощью объектива «большого» увеличения (х40) или иммерсионной микроскопии.

5. Морфология боррелий – возбудителей возвратного тифа (Borrelia recurrentis). Мазок из крови больного возвратным тифом (демонстрация). Окраска по Романовскому - Гимза. Краситель состоит из смеси азура-2 (продукт окисления метиленового синего) и эозина. Среди эритроцитов заметны тонкие лиловые удлиненные спирохеты, образующие до 9 крупных неравномерных завитков.

6. Морфология возбудителя сифилиса (Treponema pallidum). Окраска по Бурри (тушевой препарат). На темном фоне видны бесцветные трепонемы с 8 - 12 равномерными завитками.

7. Морфология и подвижность лептоспир - Leptospira interrogans. Темнопольная микроскопия (демонстрация). Представители этого рода имеют тонкие частые неглубокие завитки и обладают своеобразным движением, во время которого концы вращаются под углом к основной части тела. В стадии покоя имеют форму крючка. В темнопольном микроскопе используются специальные конденсоры (параболоид-конденсор с затемнением в центре и внутренней зеркальной поверхностью для отражения лучей света, либо кардиоид-конденсор, в котором лучи света отражаются сначала от выпуклой поверхности, а затем от вогнутой). Темнопольные конденсоры создают эффект бокового освещения, в результате чего на темном фоне видны светящиеся микроорганизмы. Морфология спирохет представлена на рис. 20.

8. Морфология риккетсий – возбудителей эпидемического сыпного тифа (Rickettsia provazeki).Окраска по Здродовскому. Методика окраски:

· Окраска мазка фуксином Циля в течение 5 минут.

· Промывание водой.

· Обработка мазка 0,01% раствором хлористоводородной кислоты.

· Промывание водой.

· Окраска метиленовым синим в течение 1 минуты.

· Промывание водой, высушивание, микроскопия. Риккетсии, окрашенные по этому методу, выглядят в виде мелких полиморфных микроорганизмов рубиново-красного цвета.

9. Хламидии (Chlamidia trachomatis) в мазках из уретры больных урогенитальным хламидиозом (внутри - и внеклеточное расположение). Демонстрационный препарат, окраска по Романовскому-Гимза.

10. Актиномицеты в материале от больного актиномикозом (окраска по Романовскому-Гимза). Зарисовать типичные для этого заболевания друзы актиномицетов, отметить лучистую структуру актиномицетов.

Тема 4. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. АСЕПТИКА, АНТИСЕПТИКА, ДЕЗИНФЕКЦИЯ, СТЕРИЛИЗАЦИЯ. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. МЕТОДЫ И ЭТАПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

1. На середину обезжиренного предметного стекла нанесите петлей 1-2 капли бульонной культуры.

2. Осторожно покройте каплю чистым покровным стеклом.

3. Микроскопируйте с приспущенным конденсором. Используйте объективы с увеличением 40 х.

4. Можно также использовать иммерсионный объектив 100х, нанося на покровное стекло одну каплю иммерсионного масла.

При исследовании живых бактерий следует отличать активную подвижность у отдельных микроорганизмов, свидетельствующую о наличии у них жгутиков, от пассивного броуновского движения (движение бактерий в одном направлении).

Занятие № 7

ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изучение микрофлоры ротовой полости

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из зубного налета, окраска простым методом, микроскопия и зарисовка препарата.

Приготовление мазка из зубного налета

1. На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.

2. В правую руку возьмите деревянную палочку (зубочистку) и проведите ею между зубами и у основания зубов, снимая небольшое количество зубного налета.

3. Погрузите палочку в каплю физраствора, равномерно распределите зубной налет по стеклу и приготовьте мазок в виде небольшого круга (d»2см).

4. Прожгите в пламени спиртовки конец палочки, потушите и выбросьте ее в урну.

5. После полного высушивания зафиксируйтемазок.

Окраска мазка простым методом с использованием метиленового синего:

1. После охлаждения предметного стекла нанесите 1-2 капли водного раствора метиленового синего на фиксированный мазок (чтобы он был полностью покрыт краской).

2. Окрашивайте в течение 2-3 минут.

3. Смойте краску водой.

4. Просушите препарат фильтровальной бумагой.

Занятие № 8

ОСНОВЫ УЧЕНИЯ ОБ ИНФЕКЦИИ

Биологический метод исследования

1. Приготовление мазков-отпечатков из органов трупа инфицированной мыши, окраска по Граму, микроскопия и зарисовка препаратов.

Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки, почек небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу, прижимая кусочек ткани к поверхностью разреза.

Мазки-отпечатки фиксируют и окрашивают метиленовым синим или по Граму.

При микроскопии отмеча­ют присутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях.

Занятие № 9

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ХИМИОТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам

1. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

2. Определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков.

Качественный метод определения чувствительности бак­терий к антибиотикам (метод дисков).

Бумажные диски, про­питанные определенными антибиотиками, помещают на по­верхность мясо-пептонного агара в чашках Петри, предвари­тельно засеянных «газоном» исследуемой бактериальной культуры.

Посевы инкубируют в течение 16-24 ч, после чего учитывают результаты опыта по образованию светлых зон задержки роста бактерий вокруг дисков. По диаметру этих зон ориентиро­вочно судят о чувствительности бактерий к антибиотикам.

Так, зоны диаметром до 15 мм указывают на слабую, а с диаметром до 25 мм - на среднюю и более 25 мм - на сравнительно высо­кую чувствительность исследуемого микроорганизма к анти­биотику.

Количественный метод определения чувствительности бак­терий к антибиотикам (определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков).

Данный метод считается наиболее точ­ным для количественного определения чувствительности бак­терий к антибиотикам.

Основной раствор антибиотика, содер­жащий, например, 100 ЕД/мл, готовят с помощью бу­ферного раствора или специального растворителя.

Серийные разведения препарата (двукратные – 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 )готовят в пробирках, содержащих 1 мл мясо-пептонного бульона: в 1-ю пробирку вносят 1 мл исход­ного раствора препарата, перемешивают и переносят в следующую, в которой уже содержится 1 мл МПБ, и т.д. – таким методом делают серию (ряд) последовательных разведений препарата от 50 до 0,39 ЕД/мл в равных объемах питательной среды.

В каждую про­бирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии, густотой 1 млрд/мл по оптическому стандарту. Одновременно ставят контроли - бактерий (1 мл мясо-пептонного бульона+ +0,1 мл суспензии бактерий) и антибиотика (мясо-пептонный бульон + антибиотик).

Посевы инкубируют, после чего отмечают результаты. Отсутствие по­мутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.

Бактериостатической дозой или минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) называется наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которой угнетает­ся видимый рост бактерий.

Для определения бактерицидного действия препарата до­полнительно производят высевы из пробирок, в которых от­сутствует видимый рост бактерий, на чашки Петри с плотной питательной средой, не содержащей антибиотика.

Наимень­шая концентрация антибиотика, вызывающая полную гибель испытуемых бактерий, о чем свидетельствует отсутствие роста на агаре без антибиотинка, называется минимальной бактерицидной концентрацией (МБК) .

Иммунология

Занятие № 11

ИММУНОЛОГИЯ КАК НАУКА. ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИММУНИТЕТ

Различные методики по восстановлению кожи, ее красоты, эластичности, молодости выделяют биоревитализацию, как самую безопасную. Одним из популярных препаратов, используемых во время процедуры, стал Вискодерм. Он выгодно отличается своим составом и действием.

Описание препарата Вискодерм

Главным действующим компонентом инъекционного препарата, по консистенции напоминающего гель или вязкую жидкость, является гиалуроновая кислота. Производителем продукта является итальянская компания IBSA Farmaceutici. Выход Вискодерма на российский рынок совпал с завоеванием и европейского рынка в 2009 году. Одобрение американского агентства, следящего за качеством медикаментов, препарат получил только в 2014 году.

Линейка препаратов

Вискодерм представлен тремя видами препарата с различными концентрациями гиалуроновой кислоты:

1. Вискодерм 0,8%ГК отличается минимальным содержанием действующего вещества. Инъекции вводятся на уровне эпидермиса. Применение состава рекомендуется для коррекции ранних возрастных изменений, уничтожения следов стресса, курения, излишней любви к солнцу. Этот вариант препарата удачно подходит для заботы о нежной коже вокруг глаз.
2. Вискодерм 1,6%ГК предназначен для борьбы со средними признаками старения. Инъекции вводятся в верхний слой дермы, что позволяет избавиться от обезвоживания кожи, подготовить ее к пластическим операциям и восстановить после них. Эта форма выпуска используется для сохранения молодости рук и зоны декольте.
3. Вискодерм 2.0%ГК вводится в средний и глубокий слой дермы для коррекции серьезных возрастных изменений. С его помощью удается устранить глубокие морщины, старые шрамы и растяжки.

Состав:

• Основным компонентом является синтетически полученная гиалуроновая кислота. Она освобождена от белковых соединений, способных спровоцировать развитие аллергической реакции.
• Минеральные элементы представлены медью, марганцем, цинком, железом, оловом и кальцием.
• Аминокислоты, среди которых изолейцин, аланин, аргинин, глицин.
• Витамины группы В, представленные фолиевой кислотой, инозитолом, холинхлоридом.

Показания к применению

Инъекции используются при:

• Проявлении первых признаков старения кожи с появлением мелких морщинок.
• Для борьбы с явно выраженными признаками старения.
• Обращаться за помощью к уникальному средству следует при потере кожей тонуса и упругости, появлении глубоких морщин.

Показаниями также являются:

• обезвоживание кожных покровов;
• чрезмерная сухость от природы;
• шрамы от акне.

Применять препарат допустимо на любом участке тела, требующем дополнительной заботы.

Противопоказания:

• Необходимо забыть об инъекциях девушкам в возрасте младше 25 лет, а также беременным и кормящим мамочкам.
• Предварительно необходимо пройти тест на свертываемость крови. При низком показателе процедура проводиться не будет.
• Также следует заранее провести тест на выявление аллергической реакции на саму гиалуроновую кислоту и местные анестетики. Положительная реакция означает невозможность проведения процедуры без серьезного риска для здоровья, красоты и даже жизни клиентки.
• Непременным противопоказанием к вводу косметического средства является наличие системных заболеваний соединительной ткани, инфекционные заболевания, онкология, аутоиммунные патологии.

Эффект от применения

Гиалуроновая кислота – элемент, содержащийся в коже. От него зависит эффективность работы механизма по созданию коллагена. Без последнего невозможно добиться упругости и эластичности:

• После применения кожа заметно разглаживается, ее рельеф становится ровным. Исчезают морщинки, морщины, складки и небольшие рубцы.
• Капиллярная сеть обретает надежного защитника, что снижает активность купероза, скрадывает следы его деятельности. Восстанавливается здоровая окраска лица, при этом участки с гиперпигментацией утрачивают свою интенсивность.
• Воздействие сокращает размер пор, снижает интенсивность выделения кожного сала, регулирует работу сальных желез, улучшает состояние волос.
• Агрессивное химическое воздействие, в том числе и объемное моделирование, пилинг требуют оптимизации достигнутых результатов. Вискодерм превосходно справляется с задачей.
• Воздействие на тело лазером и пластическая хирургия требуют серьезного реабилитационного периода. Значительно сократить его продолжительность помогают инъекции.

Способы введения

В зависимости от состояния кожи и преследуемой цели специалист-косметолог может выбрать определенную глубину введения соответствующей формы препарата:

• Для воздействия на верхний слой кожи достаточно ввести препарат в эпидермис. Это окажет необходимую стимуляцию обменных процессов, необходимых для разглаживания мелких морщин и возвращения сияющего цвета коже.
• Для воздействия на способность к регенерации кожи инъекции проводят в верхний слой дермы.
• Глубокое воздействие необходимо для провоцирования выработки собственной эндогенной кислоты, необходимой в борьбе с глубокими морщинами.

Важно учитывать, что не существует и единого для всех пациентов курса. После первых инъекций делается перерыв, а затем вводится новая порция уникального средства. Продолжительность курса зависит исключительно от результата. Его можно продолжать до тех пор, пока из зеркала не начнет смотреть то самое лицо, о котором мечталось.

В зависимости от индивидуальных особенностей продолжительность перерыва может составлять 2 недели или 1 месяц.

Различны и объемы препарата, используемые за время 1 сеанса. Все зависит от площади обрабатываемых участков.

Плюсы и минусы применения препарата

Вискодерм в кратчайшие сроки увлажняет кожу, улучшает ее состояние. Видимый эффект достигается уже с первого применения, полный курс обеспечивает длительный результат. Жидкость прекрасно сочетается со многими косметическими процедурами, значительно облегчая их.

Большим плюсом является и высокое качество всех элементов, входящих в состав, что обеспечивает безопасную работу с людьми с разным типом кожи и разных возрастов.

После использования самого серьезного из линейки препаратов возникает вероятность образования синяков и отека. Выходить в таком виде на люди неприятно, поэтому придется запереться дома на несколько дней. Есть вероятность развития побочных эффектов или осложнений процедуры. Также к минусам следует отнести необходимость соблюдать определенный ритуал, после проведения процедуры и даже до нее.

Как проводится биоревитализация Вискодермом – пошаговая инструкция

1. До начала процедуры изучается болевой порог клиента. В случае если он оказывается низким используют соответствующие обезболивающие препараты местного действия.
2. Крем, в чью задачу входит притупление болевого синдрома, наносят на кожу и оставляют на полчаса. При необходимости усилить действие анестетика поверх мази накладывают пленку. После завершения предварительной подготовки кожу тщательно очищают от крема и обрабатывают антисептиком.
3. Дальше происходит непосредственное введение жидкости под кожу. Для этого используется одноразовый шприц и тонкая игла. Техника введения средства определяется его видом и участком применения. Для биоревитализации подходит папульная техника. Для ухода за областью вокруг глаз применяется техника раздавленной капли. Ее очевидным преимуществом перед первой техникой становится быстрое исчезновение отеков.
4. Линейная техника применяется для непосредственного воздействия на морщины.
5. В кабинете специалиста на обработку лица потребуется около 30 минут в общей сложности. При желании позаботиться еще и о декольте, руках, шее придется устроиться поудобнее, ведь процедура отнимет не менее одного часа.
6. Места проколов дополнительно обрабатываются антисептиком уже после введения косметического состава под кожу. Для дополнительной защиты запрещается использовать какие-либо кремы или мази непосредственно после завершения сеанса ввода препарата.

До того как идти в кабинет косметолога, рекомендуется посетить своего терапевта и проконсультироваться с ним о предстоящем мероприятии. По его направлению нужно будет сдать анализы для исследования состояния организма, чтобы убедиться в отсутствии инфекции.

Полезно посетить дерматолога для общего осмотра, а в случае появления сыпи, покраснений шелушения кожи такой визит просто необходим. Для предупреждения осложнений, лучше исключить все неблагоприятные факторы.

После процедуры следует несколько ограничить свою жизнь во избежание занесения инфекции в полученные ранки. Меры предосторожности сводятся:

• К отказу от посещения пляжа, бассейна или купания в водоеме в течение первых четырех дней после инъекций.
• В первые три дня ни о какой косметике не может быть и речи. Затем можно потихоньку начинать без злоупотребления декоративной. Нанесение привычного макияжа становится допустимым не ранее, чем на шестой день.
• К запрету на использование любых мазей, компрессов или растворов для рассасывания синяков. Под запрет попадают все местные средства лекарственного характера.

Инъекции провоцируют образование отека. Чтобы не усугублять его придется постараться и не находиться в наклон на протяжении четырех суток с момента завершения процедуры. Физическая активность с серьезными нагрузками, а также посещение спортзала и сауны, в первые четыре дня после введения препарата способна нанести серьезный ущерб красоте. Период адаптации совершенно небольшой, поэтому серьезно себя ограничивать и накладывать жесткие запреты нет необходимости.

Возможные осложнения и побочные эффекты

• Небольшая неприятность в виде небольшого отека неизбежна, но исчезнет она самостоятельно уже через пару дней.
• Появление синяков в результате глубокого воздействия омрачит впечатление от полученного результата не меньше, чем на четыре дня. В некоторых случаях следует набраться терпения на целую неделю.
• Первые два дня самые сложные и тяжелые. Реагируя на вмешательство, организм часто отзывается появлением жжения, зуда или среднего покалывания на разных участках кожи. места проколов напоминают о себе покраснением.
• Воздействие солнечных лучей или лампы солярия на измененную кожу в течение первых пяти дней способно привести к повышенной пигментации и развитию воспаления.
• Главным осложнением считается развитие фиброза ткани.

Стоимость препарата

Минимальная цена сеанса с использованием Вискодерма составляет 7000 рублей. Все зависит от количества препарата и его вида. Самым доступным является Вискодерм 0,8%ГК. Цена сеанса обычно не поднимается выше 11 000 рублей. Для состава с более высоким содержанием гиалуроновой кислоты верхним порогом является сумма в 15 тыс. рублей за сеанс. Применение Вискодерма 2.0 требует серьезных расходов. Цена сеанса колеблется в пределах 10-21 тыс. рублей.