Серологическая диагностика сифилиса: Медицинский блог врача скорой помощи.

Методы обнаружения бледной трепонемы. Наилучшим способом обнаружения бледных трепонем является метод исследования в темном поле микроскопа, что позволяет наблюдать трепонему в живом состоянии со всеми особенностями ее строения и движения.

Материал для исследования берут в основном с поверхности твердого шанкра и эрозивных папул. Предварительно их необходимо очистить с помощью примочек из изотонического раствора натрия хлорида от различных загрязнений и применявшихся ранее наружных лекарственных средств.

Перед взятием материала поверхность твердого шанкра (или другого сифилида) просушивают марлей, затем инфильтрат захватывают двумя пальцами левой руки (в резиновой перчатке) и слегка сдавливают с боков, а эрозия осторожно поглаживается платиновой петлей или ватно-марлевым тампоном до появления тканевой жидкости (без крови). Каплю полученной жидкости переносят петлей на тонкое, предварительно обезжиренное смесью спирта с эфиром предметное стекло, смешивают с таким же количеством изотонического раствора натрия хлорида и покрывают тонким покровным стеклом.

Приготовленный препарат с живыми трепонемами микроскопируют в темном поле. Для его получения необходимо конденсор в микроскопе заменить на специальный, так называемый параболоид-конденсор, и на его верхнюю линзу (под предметное стекло) нанести каплю кедрового масла или дистиллированной воды. При отсутствии параболоид-конденсора можно использовать обычный конденсор, если на верхнюю поверхность его нижней линзы прикрепить кружок плотной черной бумаги с таким расчетом, чтобы по краю линзы оставался просвет в 2-3 мм. Для предупреждения смещения кружка следует при его вырезании оставить 4 выступа, которые упирались бы в металлическую оправу линзы.

Микроскопирование в темном поле зрения . Бледная трепонема выглядит очень нежной и подвижной, слабо светящейся серебристым блеском спирально или пунктиром из-за более яркого освещения выпуклой части завитков. Она обладает активными движениями четырех видов :

сгибательное, при котором она раскачивается наподобие маятника;
ротаторное вокруг продольной оси;
поступательное, при котором чередуется то быстрое, то медленное движение вперед;
контрактильное - волнообразное движение всего тела трепонемы.

При отрицательных результатах исследования на подозрительную эрозию рекомендуется наложить на 24 или 48 ч часто меняемую повязку с изотоническим раствором натрия хлорида для очищения язвы или эрозии от вторичной флоры, после чего исследование проводят повторно. При многократных повторных отрицательных результатах исследуют пунктат из увеличенных лимфатических узлов.

Серологическая диагностика сифилиса. Серологические реакции являются важнейшим вспомогательным методом для распознавания сифилиса. С их помощью устанавливается эффективность лечения, прогнозируется течение заболевания, решаются вопросы о завершении лечения и наблюдения за больными.

Степень выраженности серологических реакций обозначается крестами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ или 1+ и отрицательная -. Кроме качественной оценки, используется и количественная постановка реакций с различными разведениями сыворотки (от 1:10 до 1:320 и выше).

Видео о сифилисе:

В настоящее время в состав комплекса серологических реакций (КСР) для диагностики сифилиса входят:

реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами;
микрореакция преципитации (МРП);
реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ, пробирочная и меланжерная);
реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в модификациях: РИФ с абсорбцией - РИФ-абс.; с сывороткой крови и капиллярной кровью; РИФ-200; РИФ с цельной спинномозговой жидкостью - РИФ-ц. (качественные постановки).

МРП проводится как в серологических лабораториях (так как входит в комплекс КСР), так и отдельно в клинико-диагностических лабораториях для более широкого охвата населения. МРП обследуются лица, подлежащие периодическим медицинским осмотрам на венерические заболевания. МРП является отборочным, а не диагностическим тестом; если она положительна, то диагноз сифилиса не устанавливается, а обследуемого направляют к дерматовенерологу, который должен подвергнуть его клиническому обследованию и организовать исследование крови на КСР.

КСР применяется для диагностики всех форм сифилиса, контроля за эффективностью лечения, обследования лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом, лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис, больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, включая лиц, направленных на искусственное прерывание беременности.

РСК на холоде применяется в случае получения отрицательного анализа при использовании термостатного метода для диагностики всех форм сифилиса.

РИТ целесообразно ставить в случаях положительных стандартных серологических реакций на сифилис у лиц без клинических и анамнестических признаков сифилиса. РИТ считается положительной при иммобилизации от 51 до 100% трепонем, слабоположительной - от 31 до 51%, сомнительной - от 21 до 30%, отрицательной - от 0 до 20%.

РИТ и РИФ необходимы для диагностики скрытых и поздних форм сифилиса; для распознавания ложноположительных результатов КСР и МР, особенно у беременных и соматических больных; при клиническом и эпидемиологическом подозрении на сифилис, а также для установления излеченности сифилиса.

РИФ-абс. рекомендуется применять при обследовании лиц, имевших половые контакты с больными сифилисом, так как она становится положительной раньше других реакций. РИФ-абс. целесообразна при формах сифилиса, сопровождающихся малой концентрацией в крови противотрепонемных антител.

Техника взятия крови для серологических реакций. Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотеком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хлорида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5-7 мл крови.

Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.

При необходимости для исследования в отдаленных лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана размером 6

Серодиагностика применяется для подтверждения клинического диагноза сифилиса, постановки диагноза скрытого сифилиса, контроля за эффективностью лече ния, как один из критериев излеченности больных сифи лисом, для профилактики сифилиса (обследование опре деленных групп населения). Серологические реакции позволяют выявлять иммунные сдвиги в организме боль ного в ответ на размножение в нем возбудителя болезни.

Антигенное строение бледной трепонемы. Наиболее изучены следующие антигены:

1) протеиновые антигены бледной трепонемы; имеют в своем составе фракцию, общую для патогенных трепонем и сапрофитных трепонем, против которой синтезируются групповые антитела; кроме того, имеется фракция, специфичная только для пато генных трепонем; протеиновые антигены бледной трепонемы высокоиммуногенны, антитела против них появляются в организме в конце инкубацион ного периода или в течение первой недели после по явления твердого шанкра;

2) антигены полисахаридной природы; мало иммуно генны, так как антитела против них не достигают значительных титров, поэтому роль этих антител в серодиагностике сифилиса незначительна;

3) липидные антигены бледной трепонемы; составля ют около 30% сухой массы клетки; помимо липидов бледной трепонемы, в организме больного появля ется большое количество веществ липидной приро ды в результате разрушения клеток тканей, в основ ном, липидов митохондриальных мембран; по видимому, они имеют такое же строение, как и липидные антигены бледной трепонемы и обладают свойствами аутоантигенов; антитела в организ ме больного появляются примерно на 5–6 й неделе после заражения.

В иммунном ответе организма принимают участие как клеточные (макрофаги, Т лимфоциты), так и гумораль ные механизмы (синтез специфических иммуноглобули нов). Появление противосифилитических антител про исходит в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа: вначале вырабатываются IgM, по мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG; IgA вырабатываются в сравнительно небольших количествах.

Вопрос о синтезе IgE и IgD в настоящее время изучен недостаточно. IgM появляются на 2–4 й неделе после за ражения и исчезают у нелеченных больных примерно че рез 18 мес; при лечении раннего сифилиса - через 3–6 мес, позднего - через 1 год. IgG появляются обычно на 4 й не деле после заражения и достигают, как правило, более вы соких титров, чем IgM. Антитела этого класса могут дли тельно сохраняться даже после клинического излечения больного.

Сифилитические антитела могут быть неспецифическими (реагины) и специфическими (противотрепонем ными). Реагины направлены против липидных антигенов бледной трепонемы и против аутоантигенов, возникаю щих вследствие деструкции клеток организма. Следует иметь в виду, что реагины обнаруживаются также в нор мальных тканях, и их количество повышается при раз личных физиологических и патологических состояниях. Эти реагины могут быть причиной так называемых био логических ложноположительных серологических реак ций на сифилис.

Специфические антитрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, направлены против бледной трепоне мы и так же как и антигены трепонемы могут быть груп поспецифичными и видоспецифичными.

Для определения антител в сыворотке крови больного используют различные серологические реакции, отли чающиеся друг от друга чувствительностью, специфич ностью, сложностью постановки и стоимостью. Учиты вая, что все серологические реакции на сифилис в опреде ленных условиях могут быть ложноположительными, их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в ди намике.

Серологические реакции, в зависимости от выявляемых ими антител, подразделяются на три группы:

I. Липидные (реагиновые) реакции:

1) микрореакции на стекле с липидными антигенами - экспресс метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП, VDRL, CMF, RPR и др.);

2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами - реакция Вассермана;

3) осадочные реакции (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.).

II. Групповые трепонемные реакции:

1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера;

2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

3) реакция иммунного прилипания (РИП).

III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции:

1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ);

2) РИФ Абс.и ее варианты (IgM FTA ABS, 19S IgM FTA ABS, и др.);

3) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА).

Различные серологические реакции используются для разных практических целей. За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются отборочные ре акции (VDRL и др.). Для диагностики (подтверждения) сифилиса применяют РСК с кардиолипиновым и трепо немным антигенами и РИФ Абс. С целью контроля за эф фективностью терапии рекомендуют VDRL в количест венном исполнении, 19S IgM FTA ABS, и в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонем ных реакций применяют РИТ. При отрицательных ре зультатах РИТ и 19S IgM FTA ABS считается, что об следуемый не страдает сифилисом.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций, включающий:

1) отборочные реакции микропреципитации (МРП)с кардиолипиновым антигеном;

2) стандартные серологические реакции - РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами;

3) РИФ и ее модификацию РИФ Абс.;

Отборочные серологические реакции на сифилис или микрореакции на стекле для экспресс?диаг? ностики

Эти реакции используются для массовых серологических обследований на сифилис (лиц декретированных профессий, больных соматических стационаров, пациен тов поликлиник и амбулаторий); для экспресс диагности ки в кожно венерологических диспансерах. Их не приме няют для обследования беременных и доноров, а также для контроля после излечения больных сифилисом.

Микрореакции можно ставить в обычных клинических лабораториях.

Постановка микрореакций осуществляется на стекле с каплей крови, плазмы, активированной или неактивиро ванной сывороткой и специальным кардиолипиновым антигеном. Кардиолипиновый антиген отличается высо кой чувствительностью и представляет собой экстракт

Бычьего сердца, обогащенный холестерином и лецити ном. МРП можно проводить по количественной методике с разведением сыворотки крови. Существует несколько вариантов микрореакций (VDRL, RPR, USR, ART), отли чающихся друг от друга в основном применяемым анти геном. В нашей стране используют микрореакции преци питации (МРП).

Преимуществом экспресс метода являются быстрота получения ответа (через 30–40 мин), небольшой объем необходимой для анализа крови (2–3 капли плазмы или сыворотки). МРП могут давать ложноположительные, а в отдельных случаях и отрицательные результаты при ак тивных формах сифилиса, поэтому окончательный диаг ноз этим методом устанавливать запрещено. У больных вторичным сифилисом (в 1% случаев) микрореакции, в частности, VDRL, могут быть отрицательными при по становке с цельной сывороткой и положительными при ее разведении (феномен прозоны, «prozoon phenome non»).

В качестве отборочных реакций рекомендуют также применять реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА). Наивысшую чувствительность этого теста отмечают у не леченных (100%) и леченных (99,6%) больных как с ран ними, так и поздними формами сифилиса. При контроле результатов лечения тест не имеет значения, так как дает отрицательные результаты в малом количестве случаев. Возможность использовать антиген Рейтера, простота, высокая чувствительность, малая стоимость ставят РПГА на первое место среди методов для диагностики сифили са. Ценность ее еще более повышается при автоматиче ском выполнении.

Диагностические подтверждающие серологические реакции при сифилисе

Стандартные серологические реакции.

Реакция Вассермана (РВ). Разработана А. Вассерманом совместно с А. Нейссером и Бруком в 1906 г. Исторически это первый серологический метод диагностики си филиса. Реакция основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде - Жангу) и определяет противолипидные антитела (реагины) - классическая реакция. В настоящее время реакцию связывания ком плимента ставят еще со специфическими трепонемными антигенами (неклассическая реакция).

Липидные антигены, используемые в РВ, являются неполноценными антигенами - гаптенами. Они не обла дают иммунногенной способностью. После специальной обработки эти гаптены приобретают свойства полноцен ных антигенов. Антигены, приготовленные из культу ральных и патогенных трепонем, представляют собой полноценные антигены.

В РВ используют одновременно два антигена: кардиолипиновый и трепонемный. Трепонемный антиген пред ставляет собой обработанную ультразвуком взвесь апато генных культуральных трепонем. Эти антигены образуют совместно с реагинами сыворотки крови больного им мунный комплекс, способный адсорбировать, связывать комплемент. Поскольку образовавшийся комплекс (реа гины + антиген + комплемент) невидим, для определения наступившего связывания комплемента необходима как индикатор гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой).

Если комплемент связан в первой фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), то гемолиз не наступит, эритроциты выпадут в осадок, легко заметный невоору женным глазом (РВ положительная).

Если в первой фазе комплемент связан не будет вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, то он используется гемолитической системой и произойдет ге молиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемо лиза в реакции Вассермана оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза 4+ (РВ резко положительная), едва начавшийся гемолиз 3+ (РВ положительная), значительный гемолиз 2+ (РВ слабоположительная), полный гемо

Лиз - РВ отрицательная.

Кроме качественной оценки РВ, имеется количественная постановка ее с различными разведениямии сыворот ки крови (1: 10, 1: 20, 1: 80, 1: 160, 1: 320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых форм сифилиса и при контроле за успешностью терапии.

Реакция Вассермана обладает недостаточной чувствительностью. Она отрицательна в начале первичной стадии, бывает негативной у 1/больных третичным активным сифилисом с поражениями кожи, слизистых оболочек, кос тей, внутренних органов, центральной нервной системы, поздним врожденным сифилисом, особенно если больные в прошлом подвергались лечению антибиотиками.

В первичном периоде сифилиса РВ становится положительной через 2–3 нед после появления твердого шан кра или на 5–6 й неделе после заражения, во вторичном - почти у 100% больных, в третичном активном - 70–75%, при спинной сухотке - у 50%, прогрессивном параличе - 95–98%.

После окончания специфического лечения первичного серопозитивного и вторичного свежего сифилиса реак ция становится отрицательной в сроки от 1,5 до 7–8 мес. При поздних формах сифилиса она может на долгие годы оставаться положительной несмотря на дополнительное лечение (серорезистентность). Для увеличения чувстви тельности РВ ставят на холоду.

Осадочные реакции (Кана, Закс - Витебского, Мейника) за рубежом в течение длительного ввремени явля лись основными для диагностики сифилиса. В нашей стране они обязательно дополняли РВ. Иммунологиче ская сущность осадочных реакций ничем не отличается от РВ, но для них готовят более концентрированные ан тигены, которые при взаимодействии с реагинами дают видимый глазом осадок, оцениваемый качественно. В на

Стоящее время эти реакции не используются.

Все реагиновые серологические реакции не являются строго специфичными и могут давать ложноположитель ные результаты.

Ложноположительные серологические реакции на сифилис. Ложноположительными (неспецифическими, биологически ложноположительными) называются по ложительные серологические реакции на сифилис у лю дей, которые никогда не болели и в момент обследования не болеют сифилисом.

В случаях ложноположительных серологических реакций в сыворотке крови обследуемых людей имеются только реагины, но отсутствуют иммобилизины, компле ментсвязывающие протеиновые антитела и антитела, оп ределяемые в РИФ.

Н. М. Овчинников (1987) выделяет три группы основных причин ложноположительных реагиновых серологических реакций на сифилис:

1) инфекционные заболевания, возбудители которых имеют антигенное сходство с бледной трепонемой (возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, леп тостероз; воспалительные процессы, обусловлен ные трепонемами, сапрофитирующими в полости рта и на половых органах);

2) физиологические и патологические состояния, приводящие к изменению обмена веществ, особен но липидного (беременность, подагра, сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, диффуз ные болезни соединительной ткани, инфаркт мио карда, сотрясение мозга, искусственная иммуниза ция, онкологические заболевания; отравление свинцом, фосфором, хлороформом; прием салици лата натрия, дигиталиса и пр.);

3) технические погрешности при постановке реакций.

Различают острые и хронические ложноположительные реакции. Острые ложноположительные реакции не стойки и их спонтанная негативация происходит в течение

4–6 мес. Хронические реакции сохраняются положительными более 6 мес.

Причинами острых биологически ложноположитель ных реакций являются беременность (особенно в послед ние недели ее и первые 10 дней после родов); воспаление легких, в частности, микоплазменной этиологии; корь, энтеровирусная инфекция, инфекционный мононуклеоз, вакцинация, наркомания, алкоголизм. Реже они наблю даются при активном туберкулезе, скарлатине, вирусной пневмонии, бруцеллезе, риккетсиозах, лептоспирозе, кори, венерической лимфогранулеме, малярии, белковом голодании. У больных, прекративших принимать нарко тики, ложноположительные серологические реакции на сифилис сохраняются до 14 мес. Иногда причинами не специфических серологических реакций бывают обшир ные травмы, сотрясение головного мозга, переломы, ин фаркт миокарда, а также технические погрешности при постановке реакций.

Хронические ложноположительные стандартные серологические реакции могут наблюдаться у больных лепрой, системной красной волчанкой, тиреоидитом Хашимото, ревматизмом, узелковым периартериитом, циррозом пе чени, саркоидозом, генерализованной склеродермией, криоглобулиновой пурпурой, злокачественными опухо лями, малярией, туберкулезом, бруцеллезом, лептоспи розом, инфекционным мононуклеозом, сахарным диабе том, болезнями крови, гипертонической болезнью, хроническим алкоголизмом и наркоманией. С возрастом количество ложноположительных результатов увеличи вается. У женщин они наблюдаются в 4,5 раза чаще, чем у мужчин. Иногда причины ложноположительных реак ций остаются неясными (идиопатические реакции) или они наблюдаются спонтанно в некоторых семьях.

Неспецифические серологические реакции составляют в среднем 0,03–2,5%. Чаще они бывают слабоположи тельными, а если положительными, то с низким титром сифилитических реагинов. При некоторых заболеваниях (лимфомах, хроническом лимфолейкозе, ревматоидном артрите, раке печени) титр их, однако, может быть высо ким. При повторном исследовании неспецифические ре акции становятся отрицательными или выраженность их снижается, в то время как титр сывороток больных сифи лисом остается таким же или нарастает.

При неспецифических результатах наблюдаются расхождения РВ и осадочных реакций. Иногда отмечается несовпадение результатов реакций при постановке ее с разными антигенами: с одним антигеном получают поло жительные результаты, с другим - отрицательные. В слу чае резкого расхождения исследования надо повторить с новой порцией крови, но не раньше, чем через неделю. Наиболее достоверным критерием истинно сифилитиче ских показаний классических серологических реакций является результат, полученный при исследовании крови с помощью РИТ, хотя она иногда также дает ложнополо жительные и ложноотрицательные результаты.

В подобных случаях следует использовать серологические реакции, позволяющие обнаружить антитела класса IgM, являющиеся наиболее специфическими для сифи лиса (IgM FTA ABS, IgM FTA 19S).

Группа специфических серологических реакций

Существует пять основных типов специфических реакций, в которых используется трепонемный антиген. Они отличаются друг от друга методами определения комплексов антиген - антитело: иммунофлюоресценция, иммобилизация, иммуноферментный анализ, гемагглю цинация, фиксация комплемента.

1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) занимает центральное положение среди специфических реакций.

Принцип ее заключается в том, что исследуемой сыворот кой обрабатывается антиген, который представляет со бой бледная трепонема штамма Никольса, полученный из орхита кролика, высушенный на предметном стекле и за фиксированный ацетоном.

После промывания препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Флюоресцирующий комплекс (античеловеческий глобу лин + флюоресцеин тиоизоционат) связывается с челове ческим глобулином на поверхности бледной трепонемы и может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии.

Для серодиагностики сифилиса используется несколько модификаций РИФ:

А) реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (РИФ6Абс.). Групповые антитела удаляются из исследуе мой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем, что резко повышает специфич ность реакции. Поскольку исследуемая сыворотка разво дится только 1:5, то модификация сохраняет высокую чувствительность. По чувствительности и специфично сти РИФ Абс. не уступает реакции Нельсона (РИТ) и на много проще последней в постановке. РИФ Абс. стано вится положительной в начале 3 й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновре менно с ним) и является методом ранней серодиагности ки сифилиса. Нередко сыворотка остается положитель ной и спустя несколько лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом - на протяжении десятилетий.

Показания для постановки РИФ Абс.:

Положительная реакция Вассермана у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных в пользу сифилиса;

Положительная реакция Вассермана у лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями;

Отрицательная реакция Вассермана у лиц с клиниче скими проявлениями сифилиса (метод ранней диагно стики сифилиса).

Переход положительной РИФ Абс. в отрицательную, в результате проведенного лечения, является аболютным критерием успешности противосифилитического лече ния.

Ложноположительные результаты РИФ Абс. отмеча ли у беременных, алкоголиков, больных с ревматоидным артритом, системной и дискоидной красной волчанкой, склеродермией, смешанной болезнью соединительной ткани, циррозом печени. Иногда реакция бывает положи тельной у здоровых людей. Кроме того, могут быть техни ческие ошибки;

Б) реакция IgM6РИФ6Абс. Выше указано, что у боль ных с ранним сифилисом в первые недели болезни по являются IgM, которые в данный период являются но сителями специфических свойств сыворотки. В более поздние сроки болезни начинают преобладать IgG. Этот же класс иммуноглобулинов ответственен и за ложнопо ложительные результаты, так как групповые антитела бывают результатом длительной по времени иммуниза ции сапрофитными трепонемами (полости рта, половых органов и др.).

Раздельное изучение классов Ig представляет особый интерес при серодиагностике врожденного сифилиса, где противотрепонемные антитела, синтезированные в орга низме ребенка, будут представлены IgM, а IgG будут ма теринского происхождения. Реакция IgM РИФ Абс. ос нована на использовании во второй фазе коньюгата анти IgM, вместо античеловеческого флюоресцирующе го глобулина.

Показания для постановки этой реакции:

Серодиагностика врожденного сифилиса, так как реак ция позволяет исключить IgG материнского происхож дения, которые проходят через плаценту и могут обу словить ложноположительный результат РИФ Абс., при отсутствии у ребенка активного сифилиса;

Дифференцировка реинфекции (повторного зараже ния) от рецидива сифилиса, при котором будет положи тельной РИФ Абс., но отрицательной IgM РИФ Абс.;

Оценка результатов лечения раннего сифилиса: при полноценном лечении IgM РИФ Абс. из положитель ной переходит в отрицательную. При постановке этой реакции в редких случаях могут наблюдаться ложнопо ложительные и ложноотрицательные результаты;

В) реакция 19SIgM6РИФ6Абс. В основе этой модифика ции РИФ лежит предварительное разделение более круп ных молекул 19SIgM от более мелких молекул 7SIgG ис следуемой сыворотки. Это разделение может быть произведено с помощью гель фильтрации. Исследование в реакции РИФ Абс. сыворотки, содержащей только фракцию 19SIgM, устраняет все возможные источники ошибок. Однако техника постановки реакции (особенно фракционирование исследуемой сыворотки) сложная и трудоемкая, что серьезно ограничивает возможность ее практического использования.

2. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ). Это первая из специфических реакций, предложенная для серодиагностики сифилиса. Принцип реакции за ключается в том, что при смешивании сыворотки больно го со взвесью живых патогенных бледных трепонем в присутствии комплемента утрачивается подвижность бледных трепонем, в то время как при смешивании взвеси бледных трепонем с сывороткой здоровых, подвижность бледных трепонем сохраняется длительное время. Выявляемые в этой реакции антитела иммобилизины относят ся к поздним антителам; они появляются позже компле ментсвязывающих антител и достигают максимального титра к десятому месяцу болезни, поэтому как метод ран ней диагностики реакция непригодна. Однако при вто ричном нелеченном сифилисе реакция бывает положи тельной в 95% случаев. При третичном сифилисе РИТ дает положительные результаты от 95 до 100% случаев. При сифилисе внутренних органов, ЦНС, врожденном сифилисе доля положительных результатов РИТ при ближается к 100%. Чувствительность и специфичность РИТ примерно такие же как в РИФ Абс., за исключением диагностики раннего сифилиса. Негативация РИТ в ре зультате полноценного лечения наступает не всегда; реак ция может оставаться положительной на протяжении многих лет. Показания к постановке реакций такие же, как для РИФ Абс. Из всех специфических реакций РИТ наиболее сложная и трудоемкая реакция, поэтому за ру бежом ее используют только при обследовании в сомни тельных случаях.

Ложноположительная РИТ может наблюдаться у больных лепрой, трепонематозными заболеваниями (пинта, беджель и пр.), злокачественными заболевания ми, красной волчанкой, сердечно сосудистыми заболева ниями, пневмонией. Следует учитывать, что РИТ может оказаться ложноположительной, если в исследуемой сы воротке содержатся трепонемоцидные вещества (напри мер, пенициллины, тетрациклины, эритромицин), вызы вающие неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем, поэтому нельзя исследовать кровь на РИТ ра нее 2 нед после окончания приема антибиотиков и других противосифилитических препаратов.

3. Иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип метода заключается в том, что антигенами бледной трепонемы сенсибилизируется поверхность твердофазового носителя (лунки панелей из полистирола или акрила). Затем в такие лунки вносится исследуемая сыворотка. При нали чии в сыворотке антител против бледных трепонем обра зуется комплекс антиген - антитело, связанный с поверх ностью носителя. На следующем этапе в лунки наливают антивидовую (против глобулинов человека) сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой или щелочной фос фатазой). Меченые антитела (конъюгат) взаимодейству ют с комплексом антиген - антитело, образуя новый ком плекс. Для его выявления в лунки наливают раствор субстрата (5 аминосалициловая кислота). Под действием фермента субстрат меняет цвет, что указывает на положи тельный результат реакции. По чувствительности и спе цифичности метод близок к РИФ Абс. Показания к по становке ИФА такие же, как для РИФ Абс. Разработаны макро и микроварианты ИФА. Реакция может быть ав томатизирована.

4. Реакция непрямой гемагглютинации (РПГА). Принцип реакции заключается в том, что в качестве антигена используются формалинизированные и таннизирован ные эритроциты, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы. При добавлении такого антигена к сыворотке больного происходит склеивание эритроци тов - гемагглютинация. Специфичность и чувствитель ность реакции выше по сравнению с другими методами обнаружения антител к бледной трепонеме при условии высокого качества антигена. Реакция становится поло жительной на 3 й неделе после заражения и остается та ковой спустя много лет после выздоровления. Число лож ноположительных и ложноотрицательных результатов невелико. Разработан микрометод этой реакции, а также автоматизированная реакция микрогемагглютинации. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (T. pallidum haemagglutination).

5. Реакция гемабсорбции в твердой фазе (IgM6SPHA) (IgM - Solid phase haemabsorption). Это новая серологическая реакция, отвечающая, видимо, всем требованиям, предъявляемым к методам серодиагностики сифилиса. Реакция высокочувствительна и специфична, технически легко выполнима, становится положительной со 2 й не дели после заражения. И хотя пока еще недостаточно фактического материала для объективной оценки ее дос тоинств и недостатков, реакция представляется весьма перспективной. Принцип ее заключается в том, что стен ки лунок полистироловой панели покрываются анти IgM против человеческой сыворотки. Затем в лунки наливает ся исследуемая сыворотка со специальным абсорбирую щим разбавителем. На третьем этапе в лунки добавляют эритроцитарный диагностикум.

В положительных случаях происходит гемагглютинация - эритроциты фиксируются на стенках лунок, в от рицательных - эритроциты оседают на дно лунок в виде диска. Реакция может быть поставлена в качественном и количественном вариантах и доступна автоматизации.

Роль серологических реакций при оценке эффективности терапии. Серологические реакции являются показа телем эффективности лечения. Их необходимо проводить перед началом, во время и после противосифилитическо го лечения. При первичном сифилисе это особенно важно для определения длительности лечения, а при вторичном и других формах сифилиса - для оценки результатов ле чения.

Многочисленными исследованиями установлены примерные сроки негативации серологических реакций у больных с различными клиническими формами сифи лиса после окончания полноценного специфического лечения. У некоторых больных, однако, несмотря на полноценное лечение, серологические реакции остаются положительными и после него. В этих случаях речь мо жет идти о серорезистентности пролеченных больных или о стойко положительных серологических реакциях.

При этом нередко употребляемое определение «сероре зистентный сифилис» следует считать неверным, так как оно заранее предполагает, что у человека, страдаю щего сифилисом, положительные серологические реак ции. Причины серорезистентности во многом остаются не ясными. По мнению Н. М. Овчинникова и Т. В. Василь ева (1987), общей причины серорезистентности не суще ствует. Также нельзя однозначно ответить, нужно ли про должать лечение таких больных. Основными причинами серорезистентности являются:

Поздно начатое и неполноценное лечение больного;

Наличие у больных сифилисом хронических сопутствующих заболеваний (туберкулез, малярия и т. п.);

Присутствие трепонем в очагах, трудно доступных для действия антибиотиков (особенно если они находятся в измененной форме или в полимембранных фагосомах);

Переход бледных трепонем в формы, трудно поддаю щиеся действию пенициллина (L формы, цисты, грану лы), а также наличие в организме больного флоры, вы рабатывающей пенициллиназу, полностью или частично нейтрализующую пенициллин; нахождение трепонем в полимембранных фагосомах клеток орга низма, что делает трепонемы недоступными для дейст вия антибиотика и антител;

Нарушения липидного обмена.

Существует также точка зрения, что серорезистент ность у лиц, получивших полноценное специфическое ле чение и не имеющих никаких признаков сифилиса, явля ется результатом аутоиммунных реакций, происходящих в организме (аутоаллергия). Возможно, что у некоторых людей серорезистентность является анамнестической следовой реакцией уже в отсутствие бледных трепонем. Таким образом, вопрос о причинах серорезистентности и необходимости продолжения лечения должен решаться индивидуально.

Техника взятия крови для серологических реакций.

Кровь для исследования на РВ, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак или не ранее чем через 4 ч после приема пищи шприцем или одной иглой (самотеком). В чистую пробирку вливают 5–7 мл крови (пробирка для исследования на РИТ должна быть специально подготов лена и стерильна).

Кровь для исследования экспресс методом берут из кончика пальца, как это делают при взятии ее на СОЭ, но берут на один капилляр больше. Можно также экс пресс метод ставить с сывороткой крови, полученной венепункцией.

При необходимости проведения исследования в некоторых лабораториях можно вместо крови пересылать су хие сыворотки. Для этого на следующий день после забо ра крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают

1 мл сыворотки в шприц и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску плотной писчей бумаги, вощанки или целлофана размером 6 8 см. На свободном крае бума ги надписывают фамилию, инициалы больного и дату за бора крови. Сыворотку на бумаге, защищенную от пря мых лучей солнца и пыли, оставляют до следующего дня при комнатной температуре; она засыхает в виде неболь ших кружков блестящей желтой стекловидной пленки. После этого полоски бумаги с высушенной сывороткой завертывают так, как завертывают аптечный порошок, и отсылают в лабораторию с указанием диагноза и повода для исследования.

Исследование спинномозговой жидкости. Ликворологическая диагностика имеет чрезвычайно важное зна чение для установления диагноза нейросифилиса, а так же при определении излеченности больного сифилисом. Лабораторное исследование спинномозговой жидкости

Рекомендуется производить перед снятием с учета после соответствующего клинико лабораторного контроля. Следует иметь в виду, что в ряде случаев патологическая спинномозговая жидкость возможна при отрицательных стандартных серологических реакциях.

Нормальная спинномозговая жидкость бесцветная, прозрачная, при хранении не образует осадка, относи тельная плотность ее 1006–1007; рН 7,35–7,4; содержание белка от 10 до 25 мг%;в1 мл нормального ликвора может содержаться от 0 до 3–5–7 форменных элементов.

Для определения специфических сифилитических изменений спинномозговой жидкости рекомендуются сле дующие тесты: определение общего содержания белка, подсчет форменных элементов, глобулиновые реакции, реакция Вассермана с тремя разведениями спинномозго вой жидкости и коллоидная реакция с хлорным золотом (реакция Ланге), РИТ, РИФ 10 и РИФц (реакция имму нофлюоресценции с цельным неразведенным ликвором).

Определение общего белка. В патологически измененной спинномозговой жидкости больного сифилисом уве личивается количество белка. Определяется это в ступен чатых разведениях ликвора изотоническим раствором хлорида натрия от 1:5 до 1:80.

Количественное определение форменных элементов.

В нормальном ликворе, как правило, содержатся единич ные форменные элементы (лимфоциты). Увеличение числа форменных элементов и появление при плеоцитозе наряду с лимфоцитами плазматических клеток и моноци тов свидетельствует о патологическом изменении спин номозговой жидкости.

Глобулиновые реакции. Важное значение в диагностике патологии ликвора имеет определение в спинномозговой жидкости тяжелой фракции белков - глобулинов. К гло булиновым реакциям относятся реакции Нонне - Апель та и Панди, в основу которых положено свойство некоторых солей в определенных концентрациях осаждать избирательно глобулины из спинномозговой жидкости.

Реакция Ланге (реакция с коллоидным раствором хлорного золота). Принцип реакции основан на том, что коллоидные растворы золота, не изменяющиеся под влиянием ступенчатых разведений нормальной спинно мозговой жидкости, при тех же условиях в патологически измененной спинномозговой жидкости в присутствии электролитов (раствора хлорида натрия) претерпевают изменение степени дисперсности в зависимости от разве дения этой жидкости. Процесс выражается изменением цвета коллоидного раствора при выпадении осадка. Реак ция Ланге с коллоидным раствором хлорного золота име ет и диагностическое, и дифференциально диагностиче ское значение при раннем определении сифилитического поражения нервной системы.

Реакция Вассермана со спинномозговой жидкостью.

При сифилисе в спинномозговой жидкости могут содер жаться реагины и антитрепонемные комплементсвязываю щие антитела, которые определяются соответствующими антигенами. В спинномозговой жидкости отсутствует комплемент, поэтому реакцию Вассермана ставят с не инактивированным ликвором. Спинномозговая жид кость исследуется в реакции Вассермана неразведенной в объеме 0,5 мл и разведенной изотоническим раствором хлорида натрия 1:1 и 1:4.

Установлено, что резкоположительная и положительная реакции Вассермана со спинномозговой жидкостью являются доказальством наличия у обследуемого сифи литической инфекции, но при этом необходимо иметь в виду, что отрицательные результаты реакции Вассермана не полностью исключают сифилис. В этих случаях необ ходима постановка других реакций.

РИФ и РИТ в спинномозговой жидкости. В настоящее время считается, что эти реакции со спинномозговой жидкостью являются абсолютно специфичными для сифилиса. РИФ в этих случаях используют в модификаци ях РИФ 10 и РИФц. Методики постановки и учет ре зультатов РИФ и РИТ в ликворе проводятся так же, как и при исследовании крови.

Диагноз активного нейросифилиса. Для оценки активности нейросифилиса можно использовать эмпириче

Ские критерии, предложенные в 1949 г. Datter и Thomas:

1) нейросифилис может протекать асимптомно даже при наличии выраженной активности патологиче ского процесса в центральной нервной системе; от сутствие клинических симптомов не является пока зателем легкого течения нейросифилиса;

2) активность нейросифилиса не определяется поло жительными стандартными и серологическими ре акциями; более достоверным критерием является их сочетание с повышенным цитозом и общим ко личеством белка в спинномозговой жидкости;

3) при излечении нейросифилиса цитоз в спинномоз говой жидкости становится нормальным через 3–4 мес после окончания терапии, тогда как количест венные стандартные серологические реакции и об щий белок приходят в норму значительно позднее;

4) у больных активным нейросифилисом после лече ния пенициллином может наблюдаться тенденция к нормализации спинномозговой жидкости, что не исключает возможности рецидива болезни. Реци дивы нейросифилиса, однако, редко возникают раньше, чем через 1 год после окончания терапии. Если в спинномозговой жидкости нормализации цитоза, общего количества белка и стандартных се рологических реакций не происходит через 6 мес после окончания специфической терапии, больно му показано повторное лечение даже при отсутст вии клинических симптомов нейросифилиса.

Кроме указанных выше критериев в США для выявле ния активного нейросифилиса используют исследование реакции IgM SPHA, РИФ Абс. и РПГА. Если первая ре акция положительна, то у больного имеется активный нейросифилис. Две последние реакции позволяют ис ключить сифилитическую инфекцию центральной нерв ной системы.

Чтобы врачу поставить точный диагноз на сифилис, нужна дополнительная и точная информация, поэтому пациента направляют на обследование, состоящее из нескольких видов анализов .

Одним из самых распространенных способов обнаружения трепонем - это исследование в темном поле микроскопа. Благодаря такому методу, специалист может видеть «живой» микроорганизм в действии. Можно отслеживать и движения бледной трепонемы, а также видеть все особенности её строения. Чтобы начать такой анализ, необходимо добыть материал, который можно взять с поверхности шанкра или очагов эрозии.

Благодаря кср на сифилис, эффективность лечения значительно возрастает, есть возможность ставить прогнозы на дальнейший исход заболевания. С помощью реакции на сифилис устанавливается полная программа терапии и контроль над состоянием больного пациента. Уровень пораженности серологических реакций обозначают крестиком и различаются так:

- отрицательная;
1+ - слабоположительная;
2+ - слабоположительная;
3+ - положительная;
4+ - резко положительная.

Кср на сифилис используется для диагностики всех форм этого венерического заболевания, в обследовании пациентов, имевшие незащищенный секс с инфицированным человеком, людям, подозревающихся на наличие бледных трепонем, а также беременным женщинам - для исключения наличия бледной трепонемы в организме.

В случае положительной Кср реакции на сифилис в результате проведённого анализа, для полной картины врач венеролог назначает ряд дополнительных анализов, и только после получения и рассмотрения результатов, ставит диагноз и определяет эффективную программу лечения. На сегодняшний день, медицина предоставляет возможность провести следующие дополнительные тесты:

РВ (реакция Вассермана). Часто может давать ложноположительный результат.
РИФ (реакция иммунофлюоресценции или метод Кунса). Имеется три метода: прямой, непрямой и с комплементом. Реакция Кунса помогает выявить антигены микробов или обнаружить наличие антител.

Благодаря проведению кср и дополнительных исследований, ошибки в диагностировании быть не должно. А значит, врач венеролог сможет расписать продуктивную программу лечения, прогнозировать течение заболевания и его излечимость. Ведь, чем раньше вы начнёте лечение, тем больше вероятности того, что эта болезнь не принесёт вам непоправимого вреда для всего организма. Сифилис - опасная и заразная болезнь, не лечение которой неминуемо приводит к смерти.

Сифилис – это опасное венерическое заболевание, которое вызвано бледной трепонемой, передается половым путем и способно поражать все органы и системы организма. В настоящее время при своевременной диагностике и проведенной терапии стало возможным полное излечение сифилиса.

Диагностирование этого недуга основывается на лабораторных и клинических данных.

Виды серологических реакций на сифилис

Среди лабораторных исследований особенно ценится серологический анализ, который требуется не только для диагностирования недуга, но и для изучения общей картины влияния лечебных мер на болезнь, изучение эффективности терапии.

Серологическая реакция на сифилис стала отдельной отраслью медицины. Стоит заметить, что созданы различные типы такой диагностики, которые во многих странах официально признаны. При этом необходимо, чтобы врач имел достаточную квалификацию в области серологии, которая потребуется для правильного истолкования результатов.

На пространстве нашей страны для серологического исследования сифилиса применяют следующую инструкцию (утверждена в 1995 году):

1. КСР (комплекс серологических реакций). В этот список входит реакция связывания трепонемные, кардиолипиновые антигены с комплементами. Также микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном;

2. Трепонемные реакции. В их составе используются реакции бледных трепонем, и реакция иммунофлюоресценции.

Этот небольшой список мер, которые обязательны для серологического анализа сифилиса имеют различную «чувствительность», специфичность, и рекомендуются строго по отношению к каждому, отдельно взятому случаю и поставленной задачи. Теперь давайте подробнее.

Микрореакция преципитации. Особенности и результаты

Применяется при массовом обследовании населения на сифилис. Существуют разновидности – микрореакция на стеле, экспресс – метод диагностики сифилиса, для чего используется как сыворотка крови обследуемых, так и плазма. Эта реакция возникает при контакте со специфическим кардиолипиновым антигеном.

Как правило, результат проведенного анализа оценивается качественно - 4+, 3+,2+, отрицательный. В свою очередь, экспресс-метод позволяет получить результат уже через полчаса, и для исследования потребуется всего лишь несколько каплей плазмы крови, что берут с пальца пациентов.

Таким же способом обследуются те лица, которые поставлены на учет в венерологическом отделении. Если применять такую методику анализа локально, изолировано, то она представляет собой лишь отборочный тест.

На основании экспресс - теста нельзя точно сказать, что пациент больной сифилисом, но при положительном результате – врач может написать направление к дерматовенерологу. Этот специалист проведет дальнейшее обследование с помощью других методик – РИФ, УСР, РИБТ. Стоит также заметить, что экспресс-анализ не проверяют у беременных женщин, доноров, так как в большинстве случаев получается ошибочный, положительный результат. Зачастую экспресс – тест могут проводить медработники, прошедшие специальную подготовку, но изучение анализа и определение результатов обязаны лаборанты.

Реакция связывания комплимента или РСК

Реакция с кардиолипиновыми и трепонемными антигенами требуется для подтверждения первоначального диагноза (если экспресс-тест и МП показали положительный результат). Правда, такую процедуру рекомендуют применять, если имеются активные проявления, или же обследуемые лица были в половом контакте с зараженным сифилисом. Кроме того, подлежат диагностированию на РСК люди, у которых подозревается скрытый (латентный) сифилис. Естественно, реакцию на связывание комплимента назначают и для того, чтобы определить эффективность терапии.

Для обследования необходимо 5-7 миллилитров крови из локтевой вены. У грудничков кровь на анализ выбирают из височной вены, или из надреза на пятке.

Забор крови у пациента необходимо делать на «голодный желудок». Далее врач оставляет образец в сухой, чистой пробирке на 2-3 часа при комнатной температуре (это необходимо для свертывания). Постановку комплекса серологических реакций производят в специально подготовленных лабораториях.

Принцип действия описываемой реакции объясняется тем, что реагины, обнаруженные в сыворотке крови предположительно больных сифилисом, умеют вступать в реакцию с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы классифицируют введенное в реакцию вещество. Для индексирования КСР используется гемолитическая система (т.е. применяется смешение эритроцитов барана с гемолитической сывороткой).

Если случился КСР, то эритроциты выпадают в осадок, и такой процесс заметно невооруженным глазом. Выраженность реакции определяется врачом по такой классификации:

4+ Резко положительный.
3+ Положительный.
2+, 1+. Слабоположительный.
Отрицательный.

Следует заметить, что кроме качественной оценки применяют количественную. Такая система оценивания требуется для того, чтобы определить стадию развития сифилиса, и эффективность проводимой терапии.

Впервые такой принцип исследования использовали в 1906 году Нейссер, Брук и Вассерман. В «роли» антигена они применили водный экстракт печени. В последующем времени, такую реакцию стали подставлять и под другие антигены, что сделало её еще более чувствительной. В настоящее время для постановки реакции советуют применять такие антигены:

Кордилипиловый антиген (экстракт из сердца быка с избыточным количеством лецитина и холестерина).
Трепонемный антиген (взвесь из апатогеннных культуральных трепонем, которая была обработана ультразвуковым излучением).

Реакция связывания этих антигенов достигает положительного результата через две – четыре недели с момента применения, и постепенно увеличивается, достигая максимума в титре, что наблюдается при появлении вторичного свежего сифилиса. Затем, титр специфических веществ постепенно снижается, и при рецидивной форме сифилиса, как правило, не превышает отметки в 1:180 – 1:120. Среди страдающих третичным проявлением сифилиса описанная реакция положительна в 70 процентах случаев.

Важно подметить, что комплекс серологических реакций не является исключительным показателем сифилиса в организме человека, и может дать неспецифические (ложноположительные) результаты. Правда, такое возникает, если специалист допустил ошибку в обследовании – некачественная процедура забора крови, грязные пробирки, низкая квалификация и пр.

Кроме того, ложноположительный результат чаще всего получают пациенты, страдающие лепрой, малярией, ситуационными недугами. Также получить ошибочный диагноз могут люди с туберкулезом, заболеваниями печени, а также те, которые принимают медикаменты. У женщин ложноположительный диагноз можно поставить, если пациентка беременна, или у неё критические дни.

У младенцев на десятом дне жизни;
При лихорадочных явлениях в течение двух недель после родов;
Если у пациента есть свежие травмы, было хирургическое вмешательство, вакцинация.

А все потому, что физико-химические реакции в сыворотке крови при таких явлениях могут также показать ложноположительный результат на сифилис.

Реакция РИФ

Для того чтобы отличить ложноположительный от истинного результатов обследования КСР, в нашей стране применяет специфические серологические реакции, такие как РИФ и РИБТ. Также такой метод исследования рекомендован для диагностики формы заболевания, и при подозрении на сифилитическую инфекцию.

Для проведения данной процедуры потребуется количество крови в объеме 5-10 мл, которую также можно брать из локтевой вены на «голодный желудок». Полученную кровь вливают в сухую пробирку, оставляют на некоторое время в комнате для свертывания, а позже – отправляют в обследование в специальную лабораторию, которая имеется в кожно-венерологических отделениях.

Основа реакции РИФ – это непрямо метод определения флюоресцирующих антител. Антигеном для связывания в данном случае служит взвесь обработанных ультразвуковым излучением бледных трепонем. Таким образом, вещество фиксируют на предметных стеклах, куда также выставляют вещество крови пациента вместе с антивидовой флюоресцирующей сывороткой. Для определения результата потребуется люминесцентный микроскоп, с помощью которого специалист оценит степень свечения трепонем. Считается, что при положительном результате трепонемы имеют желто-зеленый оттенок свечения, и «мощность» этого процесса оценивается плюсами (от одного до четырех). Отрицательный результат – трепонемы не светятся.

Реакция РИБТ

Другая реакция, которая помогает диагностировать сифилис – это РИБТ, которая была впервые применена в 1949 году Нельсоном и Мейером. Её основа – феномен обездвиженных, бледных трепонем антигеном из сыворотки крови больного, в которой присутствует комплемент.

В качестве антигена для реакции применяется живые, бледные трепонемы, которые получены из крови зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность трепонем проводиться под микроскопом. Результат реакции оценивается в процентах, где:

Отрицательный – 0-20%
Сомнительный – 21-31%
Слабоположительный – 31-50%
Положительный – 51-100%.

Реакция может показать положительный результат в конце первичной стадии сифилиса, и в большинстве случаев итог не меняется на протяжении всех этапов болезни. Иногда РИБТ положительна даже при полном выздоровлении. При третичном сифилисе, поражениях внутренних органов, врожденном сифилисе, когда КСР неточно показывает результаты, эта реакция дает истинные результаты в 98-100% случаев. К слову, чтобы диагностировать латентную, скрытую форму сифилиса обязательно требуется диагностика на РИБТ.

РИБТ может показать ложноположительный результат, если в исследованной крови есть элементы трепонемоционных веществ – антибиотиков, которые приводят к неспецифическому обездвиживанию живых бледных трепонем. Поэтому, брать кровь у пациента, которому предписали приём антибиотиков советуют не раньше, чем через две недели после окончания антибактериальной терапии.

Анализ спинномозговой жидкости

Часто, серологическое обследование применяют и для того, чтобы точно узнать степень поражения нервной системы сифилисом. Для этого применяют анализ на основе спинномозговой жидкости пациента. Также это исследование поможет определить белок, ферментные элементы, что свидетельствует о развитии патологии, и «облегчит» врачу уточнение диагноза. Как вы уже догадались, забор спинномозговой жидкости проводят не из пальца, а при помощи люмбальной пункции. Эта процедура требует от врача осторожности, следования всем нормативам и технике безопасности, чтобы не усугубить положение больного. Как правило, такое обследование назначается в случае подозрения любой формы сифилиса центральной нервной системы.

При серологическом обследовании на сифилис применяются реакция Вассермана с тремя антигенами и реакция Колмера . Степень позитивности этих реакций обозначается числом плюсов: + + + + (резко положительная), + + + (положительная), ++ или + (слабоположительная), ± (сомнительная), - (отрицательная). При резко положительных результатах реакций Вассермана и Колмера проводят количественное определение реагинов (по методике Боаса), что позволяет судить об эффективности проводимой терапии и помогает дифференцировать ранний и поздний скрытый сифилис. Снижение титра реагинов свидетельствует о терапевтической эффективности проводимого лечения, а высокий титр реагинов обычно выявляется у больных при раннем скрытом сифилисе.

В связи с большим объемом профилактических обследований и сложностью выполнения КСР в настоящее время широко применяется экспресс-метод серодиагностики сифилиса , который используется в качестве отборочного теста. Реакция ставится с кровью больного.

Для этой цели используется также реакция VDRL (Venereal Diseases Reseach Laboratory). При этом берут сыворотку крови больного и липоидный антиген. С помощью VDRL можно получить количественную оценку циркулирующих антител (1:2:4:8:16).

В ряде случаев серологические реакции могут давать ложноположительный результат . Ложноположительные серореакции наблюдаются при малярии, сыпном, возвратном тифе, лепре, бруцеллезе, пневмонии, скарлатине, при злокачественных опухолях, во время менструаций, за 2 нед до родов и в течение 3 нед после родов, после приема алкоголя, жирной пищи, некоторых медикаментов, при хронических пиогенных процессах, болезнях печени и др. С возрастом пациентов количество неспецифических ложноположительных результатов по стандартным серореакциям увеличивается.

Более специфическими реакциями для диагностики сифилиса являются реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) и реакция иммунофлюоресценции (РИФ). С их помощью можно отличить ложноположительные от истинно положительных стандартных серологических реакций, они позволяют выявить больных с поздними формами сифилитической инфекции, протекающей с отрицательными классическими реакциями. Неоценима роль РИБТ при распознавании ложноположительных результатов серологических реакций у беременных, когда необходимо решать вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Материалом для исследования является сыворотка больного. Сущность реакции заключается в том, что в присутствии иммобилизинов, испытуемой сыворотки и активного комплемента происходит потеря подвижности бледных трепонем. Иммобилизины, относящиеся к иммуноглобулинам класса G, появляются в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела. Поэтому она становится положительной позже, чем стандартные серореакции и РИФ. Оценка реакции производится при иммобилизации до 20 % бледных трепонем - реакция считается отрицательной; при иммобилизации от 21 до 50 % бледных трепонем - слабоположительной; при иммобилизации от 50 до 100 % - положительной. РИБТ положительная у больных с тропическими трепонематозами. Иногда реакция дает ложноположительные результаты при саркоидозе, эритематозе, туберкулезе, циррозе печени, атеросклерозе и др. Процент ложноположительных результатов несколько повышен у пожилых людей. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Принцип основан на выявлении флюоресцирующих антител, меченных флюорохромом и соединяющихся с соответствующими антигенами. Образовавшийся комплекс хорошо светится в сине-фиолетовых лучах люминесцентного микроскопа. Реакция отличается высокой чувствительностью, сохраняя при этом высокую специфичность. Она становится положительной на 3-4-й неделе после заражения сифилисом. Выявляемые с помощью этой реакции антитела относятся к группе иммуноглобулинов А.

Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200, РИФ-abc . Первая реакция считается более чувствительной, две последние - более специфическими. Поэтому РИФ-10 назначается для ранней диагностики сифилитической инфекции, РИФ-200 - в распознавании неспецифических результатов КСР, а также для диагностики других форм заболевания, в том числе и скрытого сифилиса. Главными достоинствами реакции иммунофлюоресценции с абсорбцией с бледной трепонемой являются ее довольно высокие , а также быстро наступающая реактоспособность.

Антигеном для данной реакции служит взвесь бледных трепонем из пораженных сифилисом яичек кролика, фиксированная ацетоном на предметном стекле. Могут быть использованы лиофилизированные бледные трепонемы, суспендированные в изотоническом растворе натрия хлорида. Инактивированную сыворотку инкубируют с сорбентом (трепонемы Рейтера) для абсорбирования неспецифических групповых антител. Дальнейший ход реакции ведется по методике РИФ.

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ). Она основана на способности вирулентных тканевых трепонем, сенсибилизированных сывороткой больного сифилисом, в присутствии комплемента и эритроцитов прилипать к поверхности последних. При центрифугировании смеси с эритроцитами прилипшие бледные трепонемы выпадают в осадок и исчезают из надосадочной жидкости. РИП применяют при диагностике форм сифилиса, когда на основании данных анемнеза, клиники, результатов КСР не удается подтвердить диагноз заболевания, при дифференцировании неспецифических результатов КСР, при контрольном наблюдении после окончания лечения. По специфичности и чувствительности РИПБТ близка к РИБТ и РИФ.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Принцип метода состоит в том, что формализированные тонизированные бараньи эритроциты соединяются с экстрактом из патогенных бледных трепонем и образовавшийся комплекс фиксируется на эритроцитах. Он представляет собой корпускулярный антиген. При взаимодействии его с гомологичными антителами создается иммунный комплекс, который вызывает агглютинацию эритроцитов.

===================================

Категории

Популярное